ELISPOT

 

ELISPOT技术原理

 

随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用，使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法(ELISA)检测体液中游离的细胞因子(CK)或抗体，但由于游离的循环抗体或CK的半衰期不同，使之在体液中不断的被代谢或与靶器官结合，而不能确切的反映体内的抗体及CK的水平。

80年代，国外的科研工作者根据ELISA技术的基本原理，建立了体外检测特异性抗体分泌细胞和CK分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术(ELISPOT)。

 

ELISPOT技术的历史

 

ELISPOT是30多年前便己研发成功的老技术(Elisa-Spot)。Czerkinsky 等人率先在1983年，运用该技术成功地检测出因受激而分泌抗体的B细胞频率。

从那时起世界各国免疫学者便开始一长期的ELISPOT技术竞赛，每个团队都希望能率先将此技术推广来研究T细胞免疫。

 

 

ELISPOT技术的历史

 

汇霖泽谷所掌握的ELISPOT的技术优势包含：

一、离体精确的频率测量。

二、使得高通量的T细胞分析检测成为可能。

三、与其他细胞检测技术相比需要很少的样本量。

四、可确定CD4或CD8T细胞抗原特异决定簇。

五、确定抗原特异性T细胞的亲和力。

六、可用于研究未经体外处理的离体细胞的实际细胞因子的分泌情况。

七、淋巴细胞经过ELISPOT实验流程之后保持原有的活性。

八、可用于检测冻存的人体外周血白细胞。

 

 

ELISPOT技术的应用

 

 

·灵敏地检测抗原特异性T细胞

·检测T细胞功能状态和亲合力

·监测B细胞

·区分免疫类型,TH1/Th2

·免疫监测的一种重要技术方法:

–基础免疫

–传染性疾病

–自身免疫性疾病

–肿瘤免疫

–移植免疫

–过敏反应

–疫苗研究

 

Example: 抗狂犬病病毒中和抗体效价快速荧光灶抑制实验-RFFIT

 

 

Example:Double Cytolasm/NucleiStaining

 

 

Conventional Plaque Assays